Molecular detection and genetic diversity of Dientamoeba fragilis and Enterocytozoon bieneusi in fecal samples submitted for routine parasitological examination

Objective: To detect Dientamoeba (D.) fragilis and Enterocytozoon (E.) bieneusi and to assess their genetic characteristics in stool samples submitted for routine examination in a clinical laboratory in Southeastern Brazil. Methods: In this survey, 348 stool samples from female and male individuals with age ranging from 0 to ≥55 years were analyzed by PCR amplifying and sequencing based on the small subunit ribosomal RNA (SSU rRNA) gene of D. fragilis and the internal transcribed spacer of E. bieneusi. Results: D. fragilis and E. bieneusi isolates were observed in 2.29% (8/348) and 4.59% (16/348) of the samples, respectively. These parasites were detected in stool samples from individuals of both genders, including young children under nine until adults over 55 years old. No statistically significant differences were found. All D. fragilis isolates were classified as genotype 1 and E. bieneusi isolates included genotypes D (n=15) and A (n=1). Conclusions: The findings provide relevant findings on occurrence and genetic diversity of D. fragilis and E. bieneusi, pointing to the need for the diagnosis of these parasites in routine examinations in clinical laboratories. In addition to sensitive diagnostic methods, it is mandatory that these parasites be considered relevant for physicians and laboratory staff.

Análise bioquímica e antigênica de trofozoítos de cepas de origem humana de Giardia duodenalis, Lambl (1859), isoladas e axenizadas em Botucatu, SP / Analysis biochemistry and antigenic trophozoites strains of human origin of Giardia duodebalis, Lambi (1859), isolated and axenic in Botucatu, SP

Foi realizada a análise de algumas características bioquímicas e antigênicas de duas cepas axênicas de Giardia duodenalis, isoladas em Botucatu, a partir de cistos obtidos de pacientes sintomático (BTU-11) e assintomático (BTU-10), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1), isolada e axenizada nos Estados Unidos. O objetivo desta análise foi o de se investigar diferenças entre as cepas correlacionando-as à forma clínica. Preparações contendo proteínas de membranas, proteínas solúveis (citosol) e lisados de cada cepa foram empregados na eletroforese das proteínas em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), na análise de glicoproteínas pela técnica de Con A blot, na análise antigênica pela técnica de "lmmunoblottinç" e na análise da atividade proteolítica em gel de poliacrilamida copolimerizado com.gelatina. Na análise do perfil eletroforético os padrões de bandas de proteínas das cepas BTU-10 e BTU-11 foram complexos e na maior parte homogêneos; algumas diferenças foram detectadas entre as proteínas de membranas. Várias glicoproteínas foram demonstradas, destacando-se as de 81,72, 59 kDa e a glicoproteína de 62 kDa, detectadas nas preparações de proteínas de membranas e proteínas solúveis, respectivamente. Entre estas glicoproteínas, a de 81 kDa foi detectada apenas entre as proteínas de membranas das cepas BTU-11 e P-1, isoladas de casos sintomáticos. Vários componentes antigênicos foram reconhecidos por anticorpos IgG de coelho pela técnica de "Immunoblotting". Entre estes componentes, as proteínas de 32 kDa, entre as proteínas de membranas e a de 30 kDa, entre as proteínas solúveis, parecem tratar-se de proteínas já caracterizadas como "Giardinas". Antígenos reconhecidos por IgG humana foram identificados apenas entre as proteínas de membranas, destacando-se as bandas de 64,62, 58, 52 e 47 kDa...

In the present investigation, we analysed the biochemical and antigenic characteristics of two axenic strains of Giardia duodenalis, isolated from a symptomatic (BTU-11) and an asymptomatic patient (BTU-10), in the Campus of Botucatu, UNESP. The axenic strain Portland 1 (P-1), isolated in the United States, was used as a reference strain. We aimed at detecting differences between the strains and to correlate them with the clinical presentation. Fractions containing membrane proteins or soluble proteins (cytosol proteins), and Iysates from each strain were tested in sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) for the pattern of proteins, in concanavalin-A blotting for the profile of glycoproteins and in pólyacrylamide gel co-polymerized with gelatin for evaluation of the proteolytic activity. Both Botucatu strains showed a complex and homogeneous electrophoretic pattern of proteins with some differences among membrane proteins. Several glycoproteins (gp) were detected, particularly gp81, 72, 59 kDa and gp62 in the membrane proteins and cytosol proteins, respectively. Gp 81 was demonstrated only in the membrane proteins of the BTU-11 and P-1 strains from symptomatic patients. Many antigenic components were reavealed by anti-Giardia rabbit IgG antibodies in the immunoblotting analysis. Among these components, the membrane protein p32 and cytosol protein p30 corresponded to giardin, as previously demonstrated...

Análise bioquímica e antigênica de trofozoítos de cepas de origem humana de Giardia duodenalis, Lambl (1859), isoladas e axenizadas em Botucatu, SP / Analysis biochemistry and antigenic trophozoites strains of human origin of Giardia duodebalis, Lambi (1859), isolated and axenic in Botucatu, SP

Foi realizada a análise de algumas características bioquímicas e antigênicas de duas cepas axênicas de Giardia duodenalis, isoladas em Botucatu, a partir de cistos obtidos de pacientes sintomático (BTU-11) e assintomático (BTU-10), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1), isolada e axenizada nos Estados Unidos. O objetivo desta análise foi o de se investigar diferenças entre as cepas correlacionando-as à forma clínica. Preparações contendo proteínas de membranas, proteínas solúveis (citosol) e lisados de cada cepa foram empregados na eletroforese das proteínas em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), na análise de glicoproteínas pela técnica de Con A blot, na análise antigênica pela técnica de "lmmunoblottinç" e na análise da atividade proteolítica em gel de poliacrilamida copolimerizado com.gelatina. Na análise do perfil eletroforético os padrões de bandas de proteínas das cepas BTU-10 e BTU-11 foram complexos e na maior parte homogêneos; algumas diferenças foram detectadas entre as proteínas de membranas. Várias glicoproteínas foram demonstradas, destacando-se as de 81,72, 59 kDa e a glicoproteína de 62 kDa, detectadas nas preparações de proteínas de membranas e proteínas solúveis, respectivamente. Entre estas glicoproteínas, a de 81 kDa foi detectada apenas entre as proteínas de membranas das cepas BTU-11 e P-1, isoladas de casos sintomáticos. Vários componentes antigênicos foram reconhecidos por anticorpos IgG de coelho pela técnica de "Immunoblotting". Entre estes componentes, as proteínas de 32 kDa, entre as proteínas de membranas e a de 30 kDa, entre as proteínas solúveis, parecem tratar-se de proteínas já caracterizadas como "Giardinas". Antígenos reconhecidos por IgG humana foram identificados apenas entre as proteínas de membranas, destacando-se as bandas de 64,62, 58, 52 e 47 kDa...

In the present investigation, we analysed the biochemical and antigenic characteristics of two axenic strains of Giardia duodenalis, isolated from a symptomatic (BTU-11) and an asymptomatic patient (BTU-10), in the Campus of Botucatu, UNESP. The axenic strain Portland 1 (P-1), isolated in the United States, was used as a reference strain. We aimed at detecting differences between the strains and to correlate them with the clinical presentation. Fractions containing membrane proteins or soluble proteins (cytosol proteins), and Iysates from each strain were tested in sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) for the pattern of proteins, in concanavalin-A blotting for the profile of glycoproteins and in pólyacrylamide gel co-polymerized with gelatin for evaluation of the proteolytic activity. Both Botucatu strains showed a complex and homogeneous electrophoretic pattern of proteins with some differences among membrane proteins. Several glycoproteins (gp) were detected, particularly gp81, 72, 59 kDa and gp62 in the membrane proteins and cytosol proteins, respectively. Gp 81 was demonstrated only in the membrane proteins of the BTU-11 and P-1 strains from symptomatic patients. Many antigenic components were reavealed by anti-Giardia rabbit IgG antibodies in the immunoblotting analysis. Among these components, the membrane protein p32 and cytosol protein p30 corresponded to giardin, as previously demonstrated...